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细胞趋化实验的工作流程

更新时间:2023-08-24   点击次数:379次

细胞趋化实验的工作流程

ibidi


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ibidi Chemotaxis 2D and 3D细胞趋化载玻片


可视2D/3D细胞趋化实验流程:

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开始实验前

必要设备

基本要求:

倒置相差显微镜(推荐5倍或10倍物镜)

用于延时图像采集的相机

Stage Top培养箱(大多数哺乳动物细胞类型需要)


推荐扩展:

用于并行图像采集的电动载物台

自动对焦



1.样品制备

步骤

使用ibidi µ-Slide Chemotaxis细胞趋化载玻片,可以进行具有定义的趋化梯度的可重现的趋化性测定。


首先,细胞接种,这可以在2D或3D环境中完成。孵育和细胞附着后,根据确定的加载方案,用趋化剂填充满每个腔室的两个储液池。

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ibidi 的解决方案

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µ-Slide Chemotaxis 包含3个独立的腔室,用于使用缓慢或快速迁移的细胞进行平行趋化性测定。


它允许在可重现的环境中创建精确定义的、稳定的趋化梯度。



2.活细胞成像

步骤

生理条件下的活细胞成像能够详细记录细胞随时间的迁移,这是正确分析趋化性测定所必需的过程。


成像周期的持续时间取决于细胞类型(例如,快速迁移的白细胞或缓慢迁移的肿瘤细胞或成纤维细胞)和环境条件(例如,趋化剂的类型和浓度)。用于缓慢迁移细胞的典型视频显微镜设置包括在24小时内每 2.5-10分钟拍摄一张照片。


由于每个实验最佳地包含来自20-40个单细胞的跟踪数据,因此应使用低倍显微镜物镜,例如4倍或10倍。

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MDA-MB-231 人乳腺癌细胞在胶原凝胶中迁移的延时显微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作为趋化剂观察细胞 24小时。生理条件由ibidi加热和气体培养系统维持。


ibidi的解决方案

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ibidi Stage Top Incubators ibidi加热和气体培养系统提供显微镜下的生理环境,可在短期和长期趋化性测定期间实现活细胞成像。




3.细胞追踪

步骤

通常趋化性测定的活细胞显微镜检查会创建时间图像堆栈,其中每个图像显示特定时间点的确切细胞位置。


为了量化它们的运动,通过确定它们在图像堆栈的每一帧上的位置来跟踪单个细胞。跟踪可以手动完成,也可以使用特殊软件自动完成。之后,每个跟踪单元格 (x, y)的位置值可用于每个时间点(t)并可以进一步分析。

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使用ImageJ手动跟踪插件跟踪后的细胞跟踪可视化。


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跟踪后ImageJ手动跟踪插件的输出;具有每个时间点(t)的每个被跟踪单元(x,y)的位置值的数据表。


ibidi的解决方案

自动跟踪和数据分析:

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis图像分析是一种基于AI的自动图像分析解决方案,用于趋化性测定。基于网络的软件将快速而强大的细胞跟踪与人工智能 (AI) 相结合,无需标记即可进行客观且可重复的分析。只需将您的数据上传到您的FastTrack AI帐户,即可开始分析工作。在1到2小时内,您将收到一份详细的报告供下载和进一步评估。

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手动跟踪:

ImageJ手动跟踪插件有助于在趋化性测定中手动跟踪细胞迁移。

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4.数据分析
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趋化性测定数据分析步骤:

数据绘图

定量与统计分析

数据解释


订购信息:

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